大气细颗粒物PM2.5诱导肺上皮MLE-12细胞的氧化应激和自噬

摘要

目的 研究大气细颗粒物PM2.5对小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞MLE-12细胞的氧化应激和自噬的影响.方法 用采集和处理的2009年北京市细颗粒物PM2.5 25,50,100和200 mg· L-1暴露处理MLE-12细胞24和48 h,用MTT比色法测定细胞存活率,双乙酰基二氯荧光素(DCFH-DA)荧光探针检测细胞内活性氧类(ROS)自由基生成,Western蛋白质印迹法检测微管相关蛋白1轻链3Ⅰ蛋白(LC3 Ⅰ)和LC3Ⅱ表达,激光共聚焦显微镜观察细胞自噬体的形成.结果 与细胞对照组比较,PM2.5100和200 mg· L-1处理24 h组细胞存活率明显降低,分别降低28％和33％(P＜0.01);暴露处理48 h,PM2.5 25 ～200 mg·L-1组细胞存活率均明显下降(P＜0.01),并呈浓度效应关系(R2=0.4940,P＜0.01).PM2.5 100和200 mg·L-1处理MLE-12细胞3h,胞内ROS水平较细胞对照组显著升高,分别升高27.6％和60.7％(P＜0.01).此外,PM2.5100 mg·L-1处理细胞12,24和48 h及PM25 50,100和200 mg·L-1处理细胞24 h细胞自噬标志物LC3 Ⅱ蛋白表达均明显增强,呈现明显的时间效应(R2=0.9150,P＜0.01)和浓度效应(R2=0.6338,P＜0.01)关系.PM2,5100 mg·L-1处理24 h细胞内自噬体荧光强度明显升高(P＜0.05),细胞核周边有明显的自噬泡环绕.结论 PM2.5诱导肺泡Ⅱ型上皮MLE-12细胞的氧化应激,并引发细胞自噬.