miR-142-3p调控高迁移率族蛋白1及对神经母细胞瘤顺铂化疗敏感性的影响

摘要

目的研究miR-142-3p靶向调控高迁移率族蛋白1（high mobility group box-1 protein,HMGB1）及其对神经母细胞瘤细胞顺铂（CDDP）化疗敏感性影响的分子机制。方法①构建神经母细胞瘤耐药细胞株SH-SY5Y/CDDP,RT-PCR检测细胞内miR-142-3p的表达水平;②CCK8和Elisa检测过表达miR-142-3p对耐药细胞株SH-SY5Y/CDDP的凋亡和IC50水平的影响;③构建HMGB1 3’UTR区荧光素酶报告载体,验证miR-142-3p对HMGB1的靶向调控作用;④Westernblot检测转染miR-142-3p后SH-SY5Y细胞中HMGB1的表达水平;⑤利用siRNA敲减耐药细胞株SH-SY5Y/CDDP中HMGB1的表达,Western-blot检测siRNA的敲减效果,CCK8和Elisa方法检测SH-SY5Y/CDDP细胞的IC50和凋亡情况。结果①构建神经母细胞瘤耐药细胞株SH-SY5Y/CDDP成功,耐药细胞株IC50由原来的（4.57±0.65）μg/ml增加到（23.53±3.87）μg/ml,比非耐药细胞株提高了5.15倍;RT-PCR结果显示耐药的SH-SY5Y/CDDP细胞株中miR-142-3p表达水平显著低于正常的SH-SY5Y细胞,差异有统计学意义（P＜0.01）。②Elisa结果显示,过表达miR-142-3p后,与转染Control mimics组相比,耐药细胞株SH-SY5Y/CDDP细胞用CDDP处理后凋亡水平升高,IC50显著降低（7.02±1.38 vs 24.27±4.13）μg/ml,差异有统计学意义（P＜0.05）;③荧光素酶活性检测表明miR-142-3p能够显著抑制HMGB1的荧光素酶活性（P＜0.01）;④Western-blot结果显示,在SH-SY5Y细胞中过表达miR-142-3p后,细胞中HMGB1蛋白水平明显下调（P＜0.01）,miR-142-3p与HMGB1的表达呈负相关;⑤两条siRNA敲减HMGB1后,SH-SY5Y/CDDP耐药细胞株用CDDP处理后凋亡水平升高,细胞的IC50由对照组的（24.61±4.07）μg/ml,分别下降到（9.65±1.39）μg/ml和（8.43±1.76）,μg/ml,与对照组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论miR-142-3p的靶基因为HMGB1,miR-142-3p能够通过靶向调控HMGB1的表达而增加神经母细胞瘤细胞对CDDP化疗的敏感性。