华蟾毒它灵通过线粒体途径引起肝癌细胞凋亡

摘要

目的:探讨华蟾毒它灵对肝癌细胞增殖的影响,并初步探讨其可能的分子机制.方法:采用MTT法和乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测法检测华蟾毒它灵对肝癌细胞株SNU-739存活和毒性的影响.通过细胞集落形成实验和EdU细胞增殖实验研究华蟾毒它灵对SNU-739细胞增殖的作用.利用DAPI染色、TUNEL染色和流式细胞术检测华蟾毒它灵对SNU-739细胞凋亡的影响.采用RT-qPCR和Western blot法检测细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax的水平及NF-κB p65活化的情况.通过JC-1荧光探针试剂盒和ATP检测试剂盒研究华蟾毒它灵对SNU-739细胞线粒体功能的影响.利用裸鼠体外成瘤实验研究华蟾毒它灵在体内对肝癌组织生长的影响.结果:MTT和LDH检测结果表明华蟾毒它灵可抑制肝癌细胞的活性(P<0.01),集落形成实验和EdU细胞增殖实验结果表明华蟾毒它灵可显著抑制肝癌细胞增殖(P<0.01).DAPI染色结果显示,华蟾毒它灵处理后SNU-739细胞的核出现染色质凋亡形态.TUNEL染色和流式细胞检测结果显示,华蟾毒它灵可促进肝癌细胞凋亡(P<0.05).RT-qPCR和Western blot结果显示,华蟾毒它灵处理后,SNU-739细胞内Bcl-2表达下调,Bax表达上调,Bax/Bcl-2比例升高(P<0.05).另外,华蟾毒它灵作用后,肝癌细胞的线粒体膜电位呈现明显的下降趋势,ATP的生成量也显著减少(P<0.01).裸鼠体外成瘤实验表明华蟾毒它灵能够明显抑制体内肝肿瘤组织的生长(P<0.05).结论:华蟾毒它灵能抑制肝癌细胞的增殖,并通过线粒体途径促进肝癌细胞凋亡.