NF-κB在热休克预处理减轻TNF-α所致内皮细胞凋亡中的作用

摘要

目的:探讨核转录因子-κB(NF-κB)在热休克预处理减轻肿瘤坏死因子-α(TNF-α)所致内皮细胞凋亡中的作用.方法:将培养牛肺动脉内皮细胞(BPAEC)于42℃孵育1 h,37℃再培养16 h后,用TNF-α(2 500 U/mL)损伤24 h,观察BPAEC形态学变化、DNA断裂百分率,抽提DNA作琼脂糖电泳,以确定细胞凋亡情况.Western blot分析70 KD-热休克蛋白(HSP70)合成、NF-κB抑制蛋白I-κBα量的改变以及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的生成.凝胶滞留法检测NFkB活性,免疫组织化学染色法分析NFkB的移位.结果:热休克预处理可明显减轻TNF-α所致BPAEC凋亡,表现为与TNF-α损伤组相比,凋亡细胞减少,DNA电泳未出现明显"梯状"条带,DNA断裂百分率降低.进一步实验发现热休克预处理可诱导BPAEC合成HSP70,并可抑制TNF-α引起的BPAEC的I-κBα的降解、NF-κB向细胞核的移位、NF-κB与DNA的结合活性,以及iNOS的生成.结论:热休克预处理可减轻TNF-α所致BPAEC凋亡,其机制与HSP70阻断I-κBα降解,从而抑制NF-κB活化,抑制iNOS转隶合成有关.