转基因细胞系CHL-3A4可使硝苯吡啶的多药耐药逆转作用丧失

摘要

目的:检测本实验室构建的表达人细胞色素P450 3A4同功酶转基因细胞系CHL-3A4的硝苯吡啶氧化酶活性.方法:利用多药耐药细胞K562r的阿霉素(ADR)耐药性可被硝苯吡啶逆转,而硝苯吡啶又可特异地被CYP3A4代谢,观察硝苯吡啶在CHL-3A4 S9混合物(S9mix)中孵育前后的生物学活性变化来判断CHL-3A4细胞的CYP3A4硝苯吡啶氧化酶活性.结果:K562r细胞在含有硝苯吡啶(NIF)(12.5μg·L-1)的培养基中培养时,对阿霉素的IC50值从不含NIF时的(6.47±0.60)mg·L-1降至(0.89±0.15)mg·L-1(P＜0.01).K562r细胞在含有分别经CHL-3A4、CHL细胞的S9组分和灭活的CHL-3A4细胞的S9组分预处理的NIF(12.5μg·L-1)的培养基中培养时,阿霉素对其的IC50值分别为(6.10±0.50)mg·L-1、(0.32±0.09)mg·L-1和(0.32±0.04)mg·L-1.前者和后两者相比P＜0.01.结论:实验室构建的表达人细胞色素P450 3A4同功酶转基因细胞系CHL-3A4具有硝苯吡啶氧化酶活性,从而进一步确证其表达产物为人CYP3A4同功酶.并为今后检测CYP同功酶活性提供了一种新的途径.