胚胎干细胞体外分化为心肌细胞诱导因素的探讨

摘要

目的:用胚胎干细胞(ESC)体外诱导分化为心肌细胞,从分子水平上研究早期心脏发育相关基因及其功能.方法:(1)胚胎干细胞的培养.(2)胚胎干细胞的分化培养.(3)被分化的心肌细胞鉴定:RNA的提取;心脏特异性引物的合成和RT-PCR反应;探针标记、纯化和比放射活性测定;RNA斑点杂交.结果:用最适条件培养液对ESC定向诱导分化,可使80%以上的ESC分化为心肌细胞.心肌细胞以同步的方式进行收缩.反转录PCR和斑点杂交的结果显示:心肌在早期发育就开始表达其特异性基因.结论:胚胎干细胞体外能诱导分化为心肌细胞.胎牛血清、二甲基亚砜和维甲酸的浓度及它们之间的组成不同,对ES细胞定向诱导为心肌细胞均有影响.最佳诱导条件是用2nmol/L维甲酸、0.6%二甲基亚砜和20%胎牛血清组成的条件培养液.