大鼠肝细胞热适应差异表达基因消减文库的构建与鉴定

摘要

目的:构建大鼠肝细胞热适应差异表达基因消减文库.方法:实验采用热适应大鼠模型、常温对照.提取肝组织mRNA,反转录cDNA并酶切、接头连接后分别以其中一组cDNA片段为tester,另一组为driver进行抑制性消减杂交(SSH)构建消减文库.PCR扩增文库和未消减对照样品中的G3PDH基因以对比评估文库特异性.初步分离、筛选以评估文库的可靠性.结果:PCR证实文库中G3PDH丰度大幅低于对照组,说明文库特异性较高.从文库中分离获得300个目的基因片段,其中27个经鉴定为差异表达基因,证实文库高效可靠.结论:通过构建优质的热适应差异表达基因消减文库,为深入研究热适应机理奠定了基础.