腺病毒介导的T-bet基因转染诱导Th1型淋巴细胞分化

摘要

目的:构建含有T细胞转录因子T-bet(T-box expressed in T cells)的重组腺病毒Ad.T-bet,并诱导Th1型淋巴细胞分化. 方法: 采用RT-PCR的方法从健康人外周血淋巴细胞的总RNA中克隆T-bet基因,亚克隆入腺病毒穿梭载体成为pAdtrack-CMV.T-bet,与腺病毒基因组载体pAdeasy-1同源重组为pAd.T-bet,经Pac I酶切后转染293细胞,用 Western blotting 和RT-PCR的方法鉴定Ad.T-bet;联合腺病毒和脂质体以感染倍数(m.o.i) 5000感染活化的淋巴细胞,用ELISA 法检测培养液中IFN-γ含量. 结果: 采用RT-PCR方法从健康人外周血淋巴细胞中扩增出T-bet基因,构建出重组腺病毒Ad.T-bet,Western blotting 和RT-PCR均检测出细胞内T-bet蛋白表达;联合Ad.T-bet和脂质体感染淋巴细胞诱导Th1型细胞因子IFN-γ持续高表达. 结论: 重组腺病毒Ad.T-bet有效诱导Th1型细胞分化,有望成为改变肿瘤患者免疫抑制状态的有效方法.