CRE-decoy ODN对慢性吗啡诱导SK-N-SH细胞 CCK及fosB mRNA表达上调的抑制作用

摘要

目的:研究以转录因子cAMP反应元件结合蛋白(CREB)为靶点的CRE-decoy ODN对慢性吗啡诱导SK-N-SH细胞胆囊收缩素(CCK)及fosB mRNA表达上调的抑制作用.方法:体外合成含cAMP反应元件CRE序列TGACGTCA的单链寡核苷酸,将自身杂交形成发卡结构.将终浓度为150 nmol/L的CRE-decoy ODN与SK-N-SH细胞孵育1 h后,加入终浓度为100 μmol/L的吗啡作用48 h,随后加入终浓度为10 μmol/L的纳络酮,戒断15min.采用电泳迁移率改变分析(EMSA)检测CRE-decoy ODN与CREB结合的序列特异性及其对慢性吗啡诱导的CREB的DNA结合活性升高的影响;细胞掺入的CRE-decoy ODN用酚:氯仿法提取,经20%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影检测;采用RT-PCR检测CCK及fosB mRNA表达.结果:慢性吗啡作用及纳络酮急性戒断使SK-N-SH细胞CREB的DNA结合活性、CCK和fosB mRNA表达明显升高,CRE-decoy ODN可特异抑制其升高.结论:CRE-decoy ODN通过特异抑制慢性吗啡诱导SK-N-SH细胞CREB的DNA结合活性而下调CCK及fosB mRNA表达.