CTGF反义寡核苷酸对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖、胶原合成的抑制效应

摘要

目的:研究结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖、胶原合成及CTGF表达的抑制作用.方法:差速贴壁法分离新生SD大鼠心肌成纤维细胞(CFs).反义、正义、错义CTGF寡核苷酸分别经阳离子脂质体介导转染CFs,并与血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)10-6mol/L共培养48h,采用MTT法测CFs生长数目,羟脯氨酸法测胶原蛋白含量,RT-PCR法及Western blotting法分别测CTGFmRNA及蛋白水平的表达.结果:AngⅡ可以在mRNA及蛋白水平明显促进CFs CTGF的表达(P＜0.01),且呈浓度-时间依赖性.CTGF反义链组的MTT反应A值、胶原蛋白含量、CTGF mRNA及蛋白水平的表达量均明显低于AngⅡ组(P＜0.01),而CTGF正义链组和错义链组与AngⅡ组无显著差异(P＞0.05).结论:AngⅡ刺激下产生的CFsCTGFmRNA和蛋白水平的表达上调,可能是心肌纤维化传导通路中的关键环节,CTGF反义寡核苷酸可以序列特异性地阻断CTGF的介导,从而抑制AngⅡ对心肌成纤维细胞增殖、胶原合成及CTGF表达的诱导作用,进一步证实CTGF可能是拮抗心肌纤维化的特异性靶位.