hGR小基因真核表达载体的构建及其在HeLa细胞中的表达

摘要

目的:构建用于体内剪接分析的人糖皮质激素受体(hGR)小基因真核表达载体.方法:以人基因组DNA为模板,设计特定的引物进行PCR扩增获得3.892 kb长的hGR小基因片段,并将其连入pMD18-TSimple载体中,限制性内切酶酶切鉴定后,再亚克隆到PcDNA3载体中,获得hGR小基因真核表达质粒PcDNA3-hGR并测序验证.Lipofectamine法转染PcDNA3-hGR至HeLa细胞,RT-PCR检测hGR小基因剪接异构体hGRα and hGRβ mRNA的表达.结果:限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实克隆片段序列与GenBank目标序列一致;PcDNA3-hGR在HeLa细胞内成功表达剪接异构体hGRα和hGRβ.结论:hGR小基因真核表达载体构建成功,为进一步研究糖皮质激素受体基因外显子9的选择性剪接提供了细胞分子模型.