三种不同细胞培养方式对体外小鼠胚胎干细胞分化为胰岛素分泌细胞诱导效果的比较

摘要

目的:比较胚胎体、胚胎体-细胞单层和细胞单层3种细胞培养方式对小鼠胚胎干细胞(ES细胞)分化为胰岛素分泌细胞的诱导效果.方法:应用胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、β细胞素(betacellulin)、激活素A(activin A)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和尼克酰胺(nicotinamide),分别以胚胎体、胚胎体-细胞单层和细胞单层3种细胞培养方式诱导小鼠ES细胞30 d后,应用RT-PCR、双硫腙(DTZ)染色和免疫组化检测分化细胞胰岛素表达,以流式细胞仪检测胰岛素阳性细胞百分比.结果:3种细胞培养方式诱导的分化细胞均可见DTZ染色和胰岛素免疫组化染色阳性细胞,RT-PCR检测到胰岛素和其它一些胰岛相关基因mRNA表达,胚胎体-细胞单层方式胰岛素mRNA表达最强,胚胎体方式次之,细胞单层方式最弱.胚胎体-细胞单层方式的胰岛素阳性细胞百分比高于胚胎体方式(P＜0.01),后者又高于细胞单层方式(P＜0.01).结论:采用胚胎体-细胞单层方式诱导可更好促进小鼠ES细胞分化为胰岛素分泌细胞.