Caspase-9途径在丁酸钠诱导结肠癌细胞株HT-29凋亡中的作用

摘要

目的: 探讨caspase-9途径在丁酸钠(NaBt)诱导人结肠癌细胞株HT-29凋亡中的作用.方法: HT-29细胞体外培养至对数生长期,分别及联合给予5.0 mmol/L丁酸钠、20 μmol/L z-VAD-fmk、z-DEVD-fmk、z-IETD-fmk、z-LEHD-fmk处理24 h,并设空白对照.以Annexin V-FITC法联合PI染色,流式细胞术检测细胞凋亡,JC-1染色检测线粒体膜电位变化,caspase活性检测试剂盒检测caspase-3、caspase-8、caspase-9的活性.结果: (1)丁酸钠诱导的HT-29细胞凋亡[(35.40±0.70)%]可被z-VAD-fmk抑制[(1.33±0.59)%],亦可被z-DEVD-fmk抑制[(1.40±0.52)%],并可被z-LEHD-fmk抑制[(1.27±0.91)%],均P<0.01;但是z-IETD-fmk不能够抑制该作用[(32.10±2.33)%],P>0.05;(2)丁酸钠干预HT-29细胞后,线粒体膜电位降低(5.53±0.91),z-VAD-fmk、z-DEVD-fmk、及z-LEHD-fmk 能够阻断这种作用(9.80±1.15, 10.23±0.50, 10.33±1.02), P<0.05;而z-IETD-fmk未显示对该作用的改变(5.93±1.31), P>0.05;(3)丁酸钠干预HT-29细胞后,caspase-3、caspase-9的活性增高2-3倍,caspase-8的活性无显著变化,P>0.05.结论: 丁酸钠主要是通过线粒体途径,激活caspase-9,启动细胞凋亡环节,从而激发下游的效应caspases,诱导HT-29细胞凋亡.