以microRNA-21为靶标的反义寡核苷酸对人白血病K562细胞的抑制作用

摘要

目的:探讨以microRNA-21为靶标的反义寡核苷酸对白血病K562细胞的生长抑制效应及可能的作用机制.方法:依据与microRNA-21序列互补的原理,设计反义寡核苷酸,人工合成并全硫代修饰,在LipofectamineTM 2000介导下,转染K562细胞.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法筛选最佳作用浓度,台盼蓝拒染法检测其对细胞生长抑制的作用,姬姆萨染色观察细胞的形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期的变化.利用荧光定量PCR技术检测反义寡核苷酸作用后细胞内microRNA-21表达水平的改变.结果:MTT结果显示反义寡核苷酸有效抑制细胞生长,分别与随机组、空白对照组进行比较有显著差异(P<0 05),反义寡核苷酸作用的最佳浓度是0 6 μmol/L.台盼蓝拒染法结果显示从转染K562细胞24 h开始,反义寡核苷酸组细胞生长明显受到抑制,抑制效应持续到72 h.姬姆萨染色显示反义寡核苷酸作用K562细胞24h后,可在细胞中见凋亡小体.流式细胞仪检测结果显示反义寡核苷酸组出现明显的亚二倍体峰,细胞周期无发生明显变化.荧光定量PCR结果显示,反义寡核苷酸可有效抑制细胞内microRNA-21的表达水平.结论:以microRNA-21为靶标的反义寡核苷酸可有效抑制人白血病K562细胞的生长,并显著促进细胞凋亡.