成熟心肌细胞诱导胚胎干细胞定向分化为心肌样细胞

摘要

目的:拟证实成熟心肌细胞对胚胎干细胞(ESCs)定向分化的诱导作用.方法:分离培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,以DAPI(4'6-联眯-2-苯基吲哚)染核作为细胞标记.取昆明小鼠3.5-4 d的囊胚培养后分离出ESCs,以1和(或)2代的小鼠ESCs细胞团与心肌细胞共培养.录像动态观察ESCs向心肌细胞分化的情况;分别于共培养后3、7、14 d对ESCs行肌钙蛋白T(cTnT)免疫荧光染色检测.结果:1代或2代的ESCs和/或细胞团与心肌细胞共培养约7 d左右出现成节律搏动的心肌样细胞;最好实验批次,可计数到1/4以上的ESCs和/或ESCs细胞团出现节律性搏动.心肌细胞共培养体系中添加0.6% DMSO时,节律搏动的心肌样细胞分化率未见提高.心肌细胞诱导组,记录已搏动和未搏动ESCs诱导分化后心肌样细胞cTnT蛋白荧光染色阳性;ESCs与心肌成纤维细胞共培养诱导组,分化的细胞cTnT蛋白荧光染阴性;0.6% DMSO诱导组约3%的细胞cTnT蛋白荧光染色阳性;DMSO联合心肌细胞诱导组,结果与单纯心肌细胞诱导组相似.结论:未经建系操作的ESCs可直接诱导分化为节律搏动的心肌细胞;成熟心肌细胞与ESCs共培养状态下,成熟心肌细胞是ESCs定向分化较强的诱导因素.