改进传代诱导法高效诱导人胚胎干细胞定向分化为内胚层细胞

摘要

目的 比较不同诱导方法将人类胚胎干细胞(hESCs)诱导分化为纯度较高的人类内胚层细胞的分化效率,探寻最佳的分化体系.方法 用两种不同诱导方法培养人类胚胎干细胞(hESCs)H9细胞株,第1组采用最新改进的体外传代诱导方法,用IV型胶原酶消化成团的hESCs为单个hESC细胞后,使用含有100 ng/ml的胚胎干细胞诱导因子活化素A(activin A)的分化诱导液体外诱导hESCs 3 d(改良组);第2组采用传统方法,直接在未经消化hESCs培养液中添加诱导因子activin A(传统组).分化完毕后免疫荧光检测两组细胞中内胚层标志物SOX17和叉头框A2(FOXA2)表达水平.结果 改良组的分化细胞具有类似内胚层细胞的形态结构,细胞体积变大,细胞之间界限清晰,形态呈现多角形,而传统组的细胞呈团状聚集生长,彼此紧密排列,细胞与细胞之间界限不清楚,细胞形态没有明显的变化.细胞免疫荧光化学检测结果显示改良组的细胞中内胚层标志物SOX17和FOXA2的表达率较传统组显著升高(P＜0.05).结论 采用最新改进的体外传代诱导法,activin A可诱导hESCs分化为高纯度的内胚层细胞,与传统方法相比较,此种新方法诱导内胚层细胞的效率明显升高.