TUNEL法原位检测心肌细胞凋亡的改进

摘要

目的:脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)是检测细胞凋亡的常用方法,但以往仍有TUNEL假阳性率高的报道.本实验目的在于探讨应用TUNEL检测心肌细胞凋亡时增强其特异性的方法.方法:缺血再灌注心肌组织的石蜡切片(2 μm)和冰冻切片(3 μm)进行TUNEL染色.分为石蜡切片HE染色组,石蜡切片常规TUNEL组,冰冻切片改良TUNEL组.石蜡切片常规TUNEL组完全按照试剂盒说明书进行,光学显微镜下观察;冰冻切片改良TUNEL组使用荧光素(FITC)标记的dUTP及4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)双重荧光染色,在共聚焦显微镜下观察.结果:TUNEL改良法凋亡背景清晰,阳性细胞主要分布在缺血再灌注损伤区域,其凋亡检出率与石蜡切片HE染色相比无显著差异(P>0.05);常规TUNEL组凋亡背景清晰度较差,非缺血再灌注损伤区域亦有大量阳性细胞出现,其凋亡率明显高于石蜡切片HE染色(P<0.01).结论:冰冻切片改良TUNEL法可能是更适宜研究SD大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的方法.