SARS-CoV-2 PLpro在对IFN-α应答的肝细胞中独立诱导过度炎症相关坏死性死亡

摘要

目的:探讨新型冠状病毒(SARS-CoV-2)木瓜蛋白酶样蛋白酶(PLpro)在对干扰素α(IFN-α)应答的肝细胞中所介导的功能蛋白质组改变及其效应机制。方法:构建稳定表达PLpro的三株单克隆Huh7肝细胞(PLpro1~3)和对应的空载细胞(NC),分别以IFN-α刺激各株细胞建立处于IFN-α应答状态的肝细胞模型,采用数据非依赖质谱分析PLpro和NC组的定量蛋白质组,以生物信息学分析,预测PLpro对IFN-α应答性肝细胞的作用机制,并采用RT-qPCR、Western blot、细胞促炎因子水平分析、乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性分析和Annexin V-Alexa Fluor 647/PI凋亡检测等方法对上述机制进行生物学验证。结果:IFN-α可显著上调空载Huh7细胞株(NC细胞)中的ISG化蛋白(P0.05)。验证性实验结果表明,在对IFN-α应答的Huh7细胞中,PLpro可显著促进细胞坏死(P<0.01)和诱导细胞毒性(P<0.01)。结论:在对IFN-α应答的肝细胞中,SARS-CoV-2 PLpro可不经上调炎症细胞因子而独立上调这些细胞因子的下游效应蛋白质,并介导肝细胞坏死性死亡。