利用Psm22α-EGFP-1质粒重组体从小鼠间充质干细胞中分选平滑肌祖细胞

摘要

目的为了从骨髓间充质干细胞中分离纯化出平滑肌祖细胞,探讨骨髓来源的平滑肌祖细胞（SMPC）向平滑肌方向分化的机制和特点。方法构建了含有 sm22α启动子序列和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）编码序列的质粒重组体后用脂质体转染的方法,将 Psm22α-EGFP-1重组体转入体外原代培养一周的小鼠间充质干细胞中。在转染后的3、5、7、10 d 分别观察平滑肌特异性蛋白sm220α启动子控制下绿色荧光蛋白表达量的变化和转入重组体后间充质细胞形态的变化,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法观测转染后的骨髓间充质干细胞中 myocardin mRNA 表达水平的变化,并以免疫荧光法检测转染后第5天骨髓间充质干细胞 CD34的表达。结果转入 Psm22α-EGFP-1重组体后的第3天,在荧光显微镜下观察到有绿色荧光蛋白表达的细胞。此后随着时间的推移,表达绿色荧光蛋白的细胞数目持续增加,在第7天时达到高峰,以后逐渐减弱。在不同时间点的绿色荧光蛋白阳性细胞百分率分别为:3 d:7%±0.13%,5 d:10%±0.32%,7 d:20%±0.26%,10 d:12%±0.18%,t=3.45,P＜0.05。在相应的时间点的转染后的骨髓间充质干细胞,myocardin mRNA 表达变化的趋势与绿色荧光表达的变化趋势大致相符。阳性对照组的脂质体的转染效率每个组均控制在70%±1.5%（P＞0.05）。在激光共聚焦显微镜下观察可见,发绿色荧光的细胞形态呈多态性,动态观察发现绿色荧光蛋白的分布趋势是从胞核逐步分布至胞质。免疫荧光显示在转染后第5天的细胞中 CD34的阳性率为5.2%±0.21%（P＞0.05）。结论在小鼠的骨髓间充质干细胞中存在着具有向平滑肌细胞方向分化潜能的祖细胞,即所谓的平滑肌祖细胞。利用 Psm22α-EGFP-1质粒重组体可以从小鼠间充质干细胞中分选出平滑肌祖细胞。