抑制hTERT表达对喉癌细胞凋亡及其相关蛋白的影响

摘要

目的探讨RNA干扰抑制端粒酶逆转录酶(human telomerase revese transcriptase, hTERT)对喉癌Hep-2细胞凋亡、P53及Caspase-3蛋白表达的影响.方法根据hTERT cDNA序列构建表达hTERT mRNA特异的、含荧光素基因的shRNA真核表达质粒pshRNA1,随机选取一段与人类基因无同源性的碱基序列构建表达shRNA的含荧光素基因的对照质粒pshRNA2,采用METAFECTENE作为转染试剂.分别以质粒pshRNA1 、pshRNA2及空白培养液转染喉癌Hep-2细胞.电镜下观测细胞凋亡小体的形成,TUNEL法检测细胞的原位凋亡,Western Blot法检测hTERT、P53、Caspase-3蛋白表达水平.结果 pshRNA1转染组hTERT蛋白表达显著下调,大量Hep-2细胞凋亡,电镜显示凋亡小体形成.pshRNA1转染组P53和Caspase-3蛋白表达水平显著高于其他处理组及空白对照组(P＜0.001),二者升高趋势具有相关性(相关系数r=0.088,P＜0.05).结论 RNAi抑制hTERT基因表达能有效诱导喉癌细胞凋亡,其可能的分子机制是诱导P53及Caspase-3蛋白表达上调.