WISP3突变型C20/A4软骨细胞Ⅱ型胶原的动力学及定位研究

摘要

目的 动态观察Wnt诱导分泌蛋白3(wnt2 inducible secreted protein 3,WISP3)突变体软骨细胞C20/A4的Ⅱ型胶原合成和分泌特点,观察其在细胞内的超微定位和超微结构变化.方法 用脉冲追踪法,在14C标记的脯氨酸下预WISP3突变体软骨细胞C20/A4后的不同时间点(30,60,120,180,240,300 min)收集细胞上清和细胞内蛋白,用液体闪烁系统检测胶原含量,用ELISA检测Ⅱ型胶原的量.用透视电镜观察突变型细胞的超微结构变化,用胶体金免疫电镜观察Ⅱ型胶原在突变型细胞内的超微定化.结果 (1)SW1353细胞及C20/A4细胞株在14C标记的脯氨酸干预后180 min,分泌到细胞培养上清的胶原及细胞内合成的胶原同时达到高峰;(2)与SW1353细胞及C20/A4细胞株比较,14C标记的脯氨酸干预后,WISP3突变型C20/A4细胞内的Ⅱ型胶原合成高峰提前到120 min,而WISP3过表达的C20/A4细胞胶原合成没有明显峰值,胶原分泌高峰均提前到120 min,胶原合成和分泌不同步.(3)透视电镜发现WISE3突变型C20/A4细胞有线粒体的肿胀、粗面内质网扩张,核膜皱缩.Ⅱ型胶原主要定位于内质网和细胞膜,排列稀疏,分布不均匀.结论 WISP3突变型C20/A4细胞的胶原合成高峰提前,胶原合成和分泌的规律和节律改变可能是SEDT-PA患者发病的机制之一.WISP3突变型C20/A4细胞超微结构的改变和Ⅱ型胶原的分布改变可能是SEDT-PA发病的病理基础.