钙调素依赖蛋白激酶家族Ⅱ表达调控对大鼠肝细胞BRL-3A凋亡的影响

摘要

目的探讨钙调素依赖蛋白激酶家族Ⅱ（Calmodulin-dependent kinases casades,CaMKⅡ）表达调控对大鼠肝细胞BRL-3A凋亡的影响。方法通过培养稳定传代的大鼠肝细胞BRL-3A细胞,并建立构建CaMKⅡγ蛋白（LV-CaMKⅡγ组）和CaMKⅡγshRNA（shRNA组）的慢病毒表达体系,同时予以灌注相应的空白载体（LV-NC组、shRNA-NC组）及空白对照（CON组）形成对照,通过Western blot法检测各组CaMKⅡ、细胞色素C（Cytochrome C,Cyt C）、凋亡诱导因子（Apoptosis inducing factor,AIF）蛋白的表达,并通过Tunel法检测大鼠肝细胞BRL-3A凋亡率。结果 LVCaMKⅡγ组的CaMKⅡ、Cyt C、AIF的蛋白表达量较CON组显著增多（均P＜0.05）;shRNA组的CaMKⅡ、Cyt C、AIF的蛋白表达量较CON组显著降低（均P＜0.05）;而CON组、LV-NC组、shRNA-NC组组间比较无显著差异（P＞0.05）。同一时点LV-CaMKⅡγ组肝细胞凋亡比CON组多,差异有统计学意义（P＜0.05）;同一时点shRNA组肝细胞凋亡比CON组少、差异有统计学意义（P＜0.05）;shRNA-NC组、LV-NC组和CON组有差异但无统计学意义（P＞0.05）。结论特异性阻断CaMKⅡ信号通路可抑制肝细胞BRL-3A凋亡;而增强的CaMKⅡ信号通路则促进肝细胞BRL-3A凋亡。