沉默Sam68基因对急性T淋巴细胞白血病细胞Jurkat增殖影响的研究;人内源性钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制蛋白在白血病中的表达

摘要

第一部分沉默Sam68基因对急性T淋巴细胞白血病细胞Jurkat增殖影响的研究 研究背景:急性T淋巴细胞白血病是一种恶性血液疾病，由未分化或低分化的淋巴细胞在造血组织中无限增殖所致，多发生于儿童和青少年。新的化疗药物、多药联合的化疗及造血干细胞移植的开展已使急性T淋巴细胞白血病的治疗现状获得很大改善，但难治性和复发性病例仍缺乏有效的治疗方法，而且治疗过程中出现的不良反应也是一个亟待解决的问题。 Sam68蛋白是细胞有丝分裂期Src蛋白酪氨酸激酶家族的底物，属于细胞内信号传导与RNA激活蛋白家族STAR（signal transducer and activator of RNA）成员。作为衔接蛋白Sam68可结合多种信号蛋白与RNA，连接信号通路与RNA代谢。近年来，文献报道Sam68在人类多种癌症中异常高表达，干扰Sam68后将会抑制癌细胞的增殖与转移能力，提示Sam68与肿瘤的发生、发展及预后有一定的相关性。本实验室前期实验在鸡B淋巴细胞白血病细胞DT40中，敲除Sam68基因，出现细胞周期阻滞和细胞增殖抑制，但是Sam68与人急性T淋巴细胞白血病关系仍不是很明确。基于这些研究，我们检测Sam68在人类白血病细胞中的表达情况，并初步探讨沉默Sam68后对人急性T淋巴细胞白血病细胞Jurkat增殖的影响。 目的:研究Sam68基因对人急性T淋巴细胞白血病细胞Jurkat增殖的影响，为寻找急性T淋巴细胞白血病新的治疗策略提供理论依据。 方法:针对Sam68 mRNA531-552靶位点设计并合成shRNA，构建pLKO-Tet-On条件性真核干扰载体，制备慢病毒并感染Jurkat细胞，强力霉素(Doxycycline)诱导干扰载体表达;用Real-time PCR和Western blot技术验证干扰效率;用改良MTT法检测沉默Sam68基因对Jurkat细胞的细胞活力的影响;用体外细胞集落形成实验观察沉默Sam68基因对细胞集落形成能力的影响;用流式细胞术分析沉默Sam68前后细胞周期的变化。 结果:与对照组相比，实验组Sam68基因的表达被有效抑制;沉默Sam68基因降低了Jurkat细胞的活力，抑制了细胞的集落形成能力并且导致S期细胞比例显著增加，G2期细胞比例显著降低(P＜0.05)。 结论:利用shRNA靶向干扰Sam68基因的表达可以有效抑制人急性T淋巴细胞白血病细胞Jurkat的增殖。 第二部分人内源性钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制蛋白在白血病中的表达 研究背景:钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Calcium/calmodulin-dependentprotein kinaseⅡ，CaMKⅡ)是钙信号下游的一种多功能丝/苏氨酸蛋白激酶，广泛分布于机体大部分重要组织器官中，调节多种生物学活动。小分子化合物能抑制CaMKⅡ的活性可进而减缓细胞的增殖。人内源性CaMKⅡ抑制蛋白(hCaMKⅡN)是树突状细胞来源的一种功能性新分子，hCaMKⅡN在某些正常和异常的组织细胞中具有一定的表达差异，hCaMKⅡN能抑制肿瘤细胞的增殖和促进肿瘤细胞凋亡，可为临床肿瘤治疗提供一种新的治疗策略。 目的:本研究旨在检测人内源性钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制蛋白（hCaMKⅡNα和hCaMKⅡNβ）在急性髓系白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)和慢性髓细胞白血病(CML)患者骨髓单个核细胞中的表达水平并初步探讨其临床意义。 方法:采用实时定量PCR的方法检测hCaMKⅡNα和hCaMKⅡNβ在正常人和AML、 ALL以及CML患者骨髓单个核细胞中的相对表达情况。 结果:AML、ALL和CML患者骨髓单个核细胞中hCaMKⅡNα和hCaMKⅡNβ的表达均明显低于正常人，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 结论:hCaMKⅡNα和hCaMKⅡNβ可能参与了AML、ALL和CML的发生与发展。

目录

第一部分 沉默Sam68基因对急性T淋巴细胞白血病细胞Jurkat增殖影响的研究

摘要

前言

材料和方法

实验结果

讨论

参考文献

第二部分 人内源性钙离子／钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制蛋白在白血病中的表达

摘要

前言

材料和方法

实验结果

讨论

参考文献

综述 Sam68功能及其在肿瘤中的作用

附录一 本课题主要构建的载体

附录二 英文缩写词

附录三 在校期间发表论文

致谢

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