疱疹性口腔炎病毒G蛋白/胸苷激酶逆转录病毒载体转移人视网膜色素上皮细胞及其表达

摘要

目的应用新型逆转录病毒载体介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus-thymidine kinase,HSV-TK)基因转移, 探讨丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)对HSV-TK基因修饰人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cells, RPE)的杀伤抑制作用.方法生产制备高滴度疱疹性口腔炎病毒G蛋白(vesicular stomatitis virus-G protein,VSV-G)/胸苷激酶(thymidine kinase,TK)和VSV-G/LacZ病毒,对NIH3T3细胞进行VSV-G/TK滴度测定;VSV-G/LacZ 感染CRL2302细胞后,以X-gal染色估计感染率;对CRL2302细胞、分离培养的RPE细胞及NIH3T3细胞感染不同病毒滴度的VSV-G/TK ,结合GCV作用,观察3种细胞生长抑制率.结果 VSV-G/TK滴度为1.2×108克隆形成单位/ml;VSV-G/LacZ感染CRL2302细胞的X-gal染色蓝染细胞率为58%;当感染复数为200时可最大的抑制细胞生长,抑制率为45%.结论 VSV-G逆转录病毒可以介导LacZ、HSV-TK基因在离体NIH3T3细胞和人RPE细胞中高效转移和表达.被HSV-TK基因修饰的细胞对GCV作用敏感,其生长受到抑制.