腺相关病毒介导胶质细胞源性神经营养因子转染牛眼虹膜色素上皮细胞

摘要

目的探讨以腺相关病毒(AAV)为载体对体外培养牛眼虹膜色素上皮细胞(IPECs)进行胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)转染,获得高效表达GDNF转基因细胞的可行性. 方法采用狭隙杂交测定AAV-GDNF的滴度,按感染复数(MOI)为50对传二代IPECs进行AAV-GDNF转染,于含3%胎牛血清DMEM培养基中连续不换液培养4周,酶联免疫吸附测定(ELISA)细胞培养上清液中GDNF的量.同样方法对传二代IPECs进行AAV介导的绿色荧光蛋白(GFP)基因转染,于含20%胎牛血清DMEM培养基中进行常规细胞培养.荧光显微镜下每2 d计数1次培养IPECs的GFP表达阳性率. 结果 (1)AAV-GFP转染后,IPECs生长正常,于转染后4 d部分IPECs开始出现GFP表达.GFP的表达在荧光显微镜490 nm波长激发光下呈黄绿色,弥漫于整个胞质.转染8～10 d后,IPECs中GFP的表达至高峰.(2)根据ELISA检测结果、经过计算,AAV-GDNF转染IPECs的培养上清液中GDNF的含量为(17.14±1.10) μg/L. 结论 AAV-GDNF能有效地转染体外培养的IPECs和表达GDNF.