体外人羊膜培养兔角膜缘上皮细胞的细胞形态与连接复合体形成的研究

摘要

目的 观察体外人羊膜上培养出的兔角膜缘上皮细胞形态特征及与羊膜基底膜连接复合体的形成.方法 将15只新西兰白兔角膜缘组织(2 mm×2 mm),于37℃ 5% CO2孵箱中用1.2 U/ml裂解酶Ⅱ处理20 min,之后在人羊膜上皮面先行浸液培养2周,后行气-液培养2周.于培养期间,每周定期进行透射电镜检查,以观察连接复合体的形成过程,培养至第4周后,采用AE5免疫组织化学、高碘酸-希夫、苏木精-伊红等染色方法鉴定分化的上皮细胞,鉴别杯状细胞,观察细胞的形态特征.结果 兔角膜缘上皮细胞体外培养10～14 d可充满人羊膜面,对AE5免疫组织化学方法染色分化出的上皮细胞均呈阳性而高碘酸-希夫染色均呈阴性.苏木精-伊红染色显示从兔角膜缘上皮细胞分化出的上皮细胞与正常兔角膜上皮细胞相比无明显差异;自培养至第14天均未见与羊膜基底膜的连接复合体形成;于第21天时仅观察到初始阶段的连接复合体,第28天时仍未见明显变化.结论 于体外人羊膜上培养的兔角膜缘上皮细胞分化出的细胞是角膜上皮细胞,其形态与正常兔角膜上皮细胞相同,并与羊膜基底膜仅形成初始阶段的连接复合体.