肿瘤坏死因子受体相关因子2对胃癌细胞生物学行为的影响及其机制

摘要

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子2（TRAF2）对胃癌AGS细胞生长、迁移和侵袭等细胞生物学行为的影响及机制。方法构建低表达TRAF2的胃癌AGS细胞株（AGS-siTRAF2）, 采用xCELLigence系统和细胞活力实验检测细胞的生长和增殖情况。采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期, 采用xCELLigence系统和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力。采用Western blot法和TransAM法检测低表达TRAF2对AGS细胞核转录因子κB（NF-κB）信号通路的影响。采用免疫组化法检测胃癌组织中TRAF2的表达, 分析TRAF2表达与胃癌临床病理特征的关系和对患者生存的影响。结果 xCELLigence系统动态检测结果显示, 从8 h开始, AGS-siTRAF2细胞的生长速度明显慢于AGS-sictrl细胞。细胞活力实验显示, 培养24、48和72 h时, AGS-siTRAF2细胞的吸光度（A）值分别为51 296.00±2 631.06、68 389.25±6 703.21和65 559.50±6 339.22, 均显著低于AGS-sictrl细胞（均P＆0.001）。流式细胞术检测结果显示, 培养24、48和72 h时, AGS-siTRAF2细胞凋亡率分别为（1.42±0.07）%、（2.98±0.11）%和（1.56±0.03）%, 均显著高于AGS-sictrl细胞（均P＆0.05）;AGS-siTRAF2细胞S期占（23.57±1.12）%, 对照组为（19.49±1.19）%, 差异有统计学意义（P=0.012）。xCELLigence系统检测显示, 从3 h开始, AGS-siTRAF2细胞的迁移能力低于AGS-sictrl细胞。Transwell实验检测结果显示, 培养24 h后, AGS-sictrl的细胞数为（121.7±6.7）个, AGS-siTRAF2的细胞数为（84.0±6.6）个, AGS-siTRAF2细胞的迁移细胞数明显少于AGS-sictrl细胞（P=0.002）。xCELLigence系统检测结果显示, 从3 h开始, AGS-siTRAF2细胞的细胞指数低于AGS-sictrl细胞。Transwell实验检测结果显示, 培养24 h, AGS-sictrl的细胞数为（109.3±3.1）个, AGS-siTRAF2的细胞数为（79.0±6.2）个, AGS-siTRAF2细胞的穿膜细胞数明显少于AGS-sictrl细胞（P=0.002）。Western blot检测结果显示, AGS-siTRAF2细胞中RelA、RelB、p50和p52表达水平均明显低于AGS-sictrl细胞。TransAM检测结果显示, AGS-siTRAF2细胞中RelA、RelB、p50和p52的活性分别为0.01±0.00、0.01±0.01、0.92±0.01和0.53±0.03, 均低于AGS-sictrl细胞（均P＆0.001）。100例胃癌组织中TRAF2高表达率为53.0%, 高于癌旁组织（38.0%）, 差异有统计学意义（P=0.033）。在管状腺癌、分化程度低、T分期高、N分期高及TNM分期高的胃癌组织中TRAF2高表达率更高（均P＆0.05）。TRAF2高表达组和低表达组患者的中位生存时间分别为17和78个月, 差异有统计学意义（P=0.010）。结论 TRAF2低表达能显著抑制胃癌AGS细胞的生长、迁移和侵袭能力。胃癌组织中TRAF2的表达增高, TRAF2的表达与胃癌的预后有关。