长链非编码RNA-肺腺癌转移相关转录子1调控食管癌EC-109细胞侵袭转移的机制

摘要

目的观察长链非编码RNA-肺腺癌转移相关转录子1（LncRNA-MALAT1）对食管癌细胞EC-109侵袭和转移的影响,并探讨其可能的作用机制。方法应用慢病毒载体shRNA对照、shRNA-MALAT1转染EC-109细胞,采用实时荧光定量PCR法检测EC-109细胞中LncRNA-MALAT1、miR-200a、ZEB1和ZEB2 mRNA的表达;采用细胞侵袭实验检测EC-109细胞的侵袭能力;采用免疫荧光、Western blot法检测EC-109细胞中上皮间质转化（EMT）信号通路相关蛋白的表达;采用双荧光素酶报告基因实验检测EC-109细胞中MALAT1与miR-200a表达的关系。结果实时荧光定量PCR检测结果显示,未转染组、转染shRNA对照组和转染shRNA-MALAT1组EC-109细胞中MALAT1 mRNA的相对表达量分别为1.00、0.97±0.08和0.43±0.06,转染shRNA-MALAT1组EC-109细胞中MALAT1mRNA的表达明显降低（P＜0.01）。未转染组、转染shRNA对照组和转染shRNA-MALAT1组EC-109细胞中ZEB1 mRNA的相对表达量分别为1.00、1.06±0.07和0.64±0.04,ZEB2 mRNA的相对表达量分别为1.00、0.98±0.05和0.51±0.04,转染shRNA-MALAT1组EC-109细胞中ZEB1和ZEB2 mRNA的相对表达量均明显降低（均P＜0.05）。转染shRNA-MALAT1组的EC-109细胞的穿膜细胞数为（96.81±10.43）个/低倍视野,与转染shRNA对照组EC-109细胞的穿膜细胞数[（278.44±13.28）个/低倍视野]比较,差异有统计学意义（P＜0.01）。免疫荧光和Western blot法检测结果显示,沉默EC-109细胞中MALAT1基因的表达可下调EMT信号通路相关蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验结果显示,与转染miRNA阴性对照组比较,共转染pmirGLO-MALAT1-wt和miR-200a模拟物可明显减少EC-109细胞的荧光素酶活性,而共转染pmirGLO-MALAT1-mut和miR-200a模拟物不能抑制EC-109细胞的荧光素酶活性。结论 LncRNA-MALAT1可能作为竞争性内源RNA,竞争性结合miR-200a,从而上调EC-109细胞中ZEB1和ZEB2的表达,促进EMT进程,导致食管癌的侵袭和转移。