TRPM8对肝细胞癌Huh7细胞侵袭和转移的影响及其作用机制

摘要

目的 探讨顺时受体电位8(chronic receptor potential 8,TRPM8)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞侵袭和转移的影响及其调控机制.方法 收集2017年3月—2019年12月于本院手术切除的20对配对HCC组织及其癌旁组织,采用免疫组化和qRT-PCR检测TRPM8表达情况.用shTRPM8转染HCC Huh7细胞(shTRPM8组),并设阴性对照组(shcontrol组),采用划痕愈合实验和Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力;免疫荧光实验检测E-cadherin和vimentin表达情况;Western blot检测AFP、TRPM8及AKT/GSK-3β/Snail信号途径相关蛋白表达情况.将构建的Huh7-LV-shTRPM8细胞通过尾静脉注入BALB/C裸鼠作为实验组(LV-shTRPM8组),以注射Huh7-LV-shNC细胞建立的裸鼠模型为对照组(LV-shNC组),6周后观察裸鼠肺转移情况.结果 TRPM8在HCC组织和细胞系中均高表达(P<0.01);与shcontrol组比较,沉默TRPM8后Huh7细胞迁移和侵袭能力减弱(P<0.01),E-cadherin表达增加(P<0.001),vimentin表达降低(P<0.001),TRPM8和Snail蛋白表达水平下调(P<0.001),而AKT和GSK-3β蛋白磷酸化程度降低(P<0.001).沉默TRPM8使裸鼠肺转移率、肺转移结节数量及肺组织中AFP和TRPM8表达下降(P<0.01).结论 TRPM8可能通过调控AKT/GSK-3β/Snail信号途径抑制HCC Huh7细胞侵袭和转移.