TIZ基因mRNA在卵巢癌细胞系中的表达及其RNA干扰载体构建

摘要

目的 检测卵巢癌细胞株中TIZ基因的mRNA表达水平,并构建TIZ基因的特异性RNA干扰(RNAi)载体.方法通过RT-PCR方法 检测卵巢癌细胞系(SKOV3、SKOV3顺铂耐药细胞、SKOV3卡铂耐药细胞、A2780、A2780卡铂耐药细胞、H08910)中TIZ mRNA的表达；根据Genebank上TIZ的mRNA序列,设计5对siRNA干扰片段,采用脂质体转染法介导siRNA干扰片段并下调卵巢癌细胞系中TIZ mRNA的表达.采用pTG19-T质粒构建TIZ和β-actint mRNA表达重组质粒并制备其标准品.采用实时定量PCR (QRT-PCR)检测siRNA干扰片段对IZ基因的下降效率,并筛选最佳siRNA干扰片段.以pGPU6/GFP/Neo载体和质粒DNA测序方法 构建pGPU6/GFP/NeosiRNA-TIZ-573重组质粒.结果 ①除卵巢癌细胞HO8910细胞无TIZ基因mRNA表达外,其余细胞均有TIZ基因mRNA表达.②细胞siRNA干扰片段筛选结果 显示介导TIZ-573片段后可下调60%细胞TIZ mRNA表达.③成功构建了TIZ基因RNAi载体pGPU6/GFP/Neo-TIZ-573.结论 多数卵巢癌细胞系表达TIZ mRNA.siRNA-TIZ-573为最佳下调细胞TIZ mRNA片段.构建的pGPU6/GFP/Neo-TIZ-573重组质粒可用于下一步的实验研究.