绿色荧光蛋白转基因小鼠诱导肝癌模型的建立

摘要

目的 建立绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转基因小鼠肝癌模型,观察 GFP 蛋白在诱癌过程中荧光的变化.方法 采用二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DENA)/四氯化碳(CCL4 )/乙醇/ DENA诱导肝癌共 20 周,实验组 50只和对照组10 只均为 GFP转基因小鼠.每周监测小鼠体重的变化;常规 HE 染色动态观察病理组织学;第 4、12、16 周处死小鼠取肝组织制作冷冻切片观察荧光表达,并以石蜡 HE 染色观察病理变化;第 20 周时处死小鼠取其肝肿物进行原代培养,观察肿瘤细胞中荧光表达和分布.结果 实验组 GFP转基因小鼠死亡 15 只,死亡率 30%(15/50).对照组 10只小鼠未发生死亡.GFP转基因小鼠在诱癌的第 4、12、16、20 周±次出现肝炎,肝硬化、癌前病变和癌变等.荧光显微镜下观察到诱癌开始前、第 4 周、第 12 周和第 16 周肝脏组织的冷冻切片有 GFP 蛋白的表达,诱癌第 20 周肝肿物原代培养中肿瘤细胞的细胞质和细胞核中有 GFP蛋白表达.结论 本实验成功建立 GFP转基因小鼠肝癌发生的动物模型,可动态观察肝癌细胞中 GFP 蛋白的表达.