大豆rbcL基因克隆、序列分析及原核表达

摘要

利用叶绿体基因组保守性的特征,根据菜豆、豌豆、烟草的rbcL基因序列设计引物,从大豆叶绿体DNA中克隆rbcL基因,全长序列为1 488bp,包括1 449bp的开放阅读框,编码482个氨基酸.相似性比较显示,此序列与其它10个物种rbcL基因核苷酸的同源性为85.37% ～95.31%,氨基酸的同源性为90.87%～ 96.47%.将该基因与表达载体pET -30a(+)连接,转化大肠杆菌Rosseta感受态细胞,PCR和酶切鉴定筛选阳性克隆,阳性菌液IPTG诱导后经10% SDS - PAGE分析,结果显示,诱导表达出分子量约为60kD的特异融合蛋白.