甘蓝型油菜温敏GMS TE5A幼蕾酵母双杂交cDNA文库的构建及筛选

摘要

为进一步解析甘蓝型油菜温敏细胞核雄性不育系(GMS) TE5A的不育机理,筛选与育性蛋白BnaA.tsMs 互作的重要蛋白.提取不育系TE5A的幼蕾(直径≤2mm)总RNA,利用SMART (switching mechanism at 5'end of the RNA transcript)技术构建酵母双杂交cDNA文库和诱饵载体pGBKT7-BnaA.tsMs,转化酵母菌株Y2H gold,检测其毒性和自激活活性,通过Mating方法筛选与蛋白BnaA.tsMs互作的蛋白,并根据基因注释推测其功能.结果成功地构建了甘蓝型油菜温敏细胞核雄性不育系TE5A幼蕾酵母双杂交cDNA文库,文库库容量为2×107cfu,重组率达到100％,插入片段平均长度大于1.8kb.发现诱饵载体pGBKT7-BnaA.tsMs对酵母没有毒性,没有自激活活性.筛选出49个候选互作蛋白,其中有丝分裂纺锤体检测点蛋白(BUBR0)、周期蛋白D3(cyc1in-D3)和F-box蛋白(FBW2)三个互作蛋白可能与该不育蛋白相互作用,共同调控该不育系TE5A的育性.