人参皂甙Rg3对正常和缺氧条件下人视网膜血管内皮细胞的作用

摘要

目的观察正常和缺氧条件下人参皂甙Rg3对人视网膜血管内皮细胞（HRCEC）增生、迁徙和管腔形成的影响。方法在正常条件的培养基中,分别加入0.0、0.1、0.5mmol/L的人参皂甙Rg3,依序分为A、B、C3个组;在150μmol/L氯化钴缺氧条件的培养基中,分别加入0.0、0.1、0.5mmol/L的人参皂甙Rg3,依序分为D、E、F3个组。在培养后24、48、72h用噻唑蓝比色法检测HRCEC的增生;在24h,用Transwell小室检测细胞迁徙,用基质胶检测细胞管腔形成,实时荧光定量逆转录-酶链聚合反应和蛋白质免疫印迹法检测细胞中血管内皮生长因子（VEGF）mRNA和蛋白质表达。结果正常或缺氧条件培养基中,均可观察到人参皂甙Rg3对HRCEC增生的抑制作用,并且这种抑制作用呈浓度与时间依赖性（F正常组浓度=30.331,F缺氧组浓度=33.402,F正常组时间=85.462,F缺氧组时间=136.045,P均＜0.05）。Transwell小室结果显示,A、B、C、D、E、F组HRCEC细胞的移行细胞数分别为（103.33±3.54）、（92.25±3.68）、（78.64±4.66）、（125.76±3.11）、（90.27±3.55）、（77.81±5.01）个。正常和缺氧条件下各组间HRCEC细胞的移行细胞数比较,差异有统计学意义（F正常组组间=28.801,F缺氧组组间=117.594,P均＜0.05）。基质胶检测结果显示,A、B、C、D、E、F组HRCEC细胞的完整管腔形成数分别为（24.3±2.2）、（15.7±1.7）、（10.1±2.3）、（26.2±1.9）、（15.1±2.6）、（8.6±1.9）个。正常和缺氧条件下各组间HRCEC细胞的完整管腔形成数比较,差异有统计学意义（F正常组组间=35.364,F缺氧组组间=50.989,P均＜0.05）。实时荧光定量逆转录-酶链聚合反应检测结果显示,A、B、C、D、E、F组HRCEC细胞的VEGF mRNA相对表达量分别为1.00±0.06、0.79±0.06、0.68±0.02、3.88±0.12、2.83±0.09、1.15±0.05。正常和缺氧条件下各组间HRCEC细胞的VEGF mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义（F正常组组间=31.303,F缺氧组组间=682.668,P均＜0.05）。蛋白质免疫印迹法检测结果显示,A、B、C、D、E、F组HRCEC细胞的VEGF蛋白质相对表达量分别为0.62±0.03、0.41±0.02、0.32±0.02、0.91±0.03、0.82±0.03、0.71±0.02。正常和缺氧条件下各组间HRCEC细胞的VEGF蛋白质相对表达量比较,差异有统计学意义（F正常组组间=125.471,F缺氧组组间=41.045,P均＜0.05）。结论人参皂甙Rg3可通过抑制HRCEC细胞增生、迁徙和管腔形成来抑制新生血管的形成,其机制可能通过抑制VEGF的表达来实现。