白细胞介素17在人视网膜血管内皮细胞增生、迁移及凋亡中的作用

摘要

目的观察白细胞介素17（IL-17）在人视网膜血管内皮细胞（HREC）增生、迁移及凋亡中的作用。方法体外培养HREC,并取对数生长期的细胞进行实验。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）检测HREC中IL-17受体（IL-17R）基因和蛋白的表达。以不含IL-17的培养液培养细胞作为对照组。以浓度50、100、200、500μg/L的IL-17培养液干预HREC,采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）增生分析法检测不同浓度IL-17对HREC细胞增生的作用,细胞划痕法测定不同浓度IL-17对HREC细胞迁移的影响。以浓度200μg/L的IL-17培养液干预HREC,采用流式细胞技术检测IL-17对HREC细胞凋亡的影响。以1、2mg/L的IL-17培养液干预HREC,应用RT-PCR检测HREC中碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）、凝血酶敏感蛋白-1（TSP-1）的mRNA表达,Western blot检测细胞中Caspase-3的蛋白表达。结果 HREC中存在IL-17R的基因和蛋白表达。CCK-8增生分析法结果显示,随着IL-17培养液的浓度不断增加,吸光度[A,旧称光密度（OD）]值也呈上升趋势。与对照组比较,200、500μg/L干预组A值明显升高,差异均有统计学意义（t=-3.235、-6.276,P=0.032、0.000）。细胞划痕法检测结果显示,干预12、24h时,100μg/L干预组（t=-3.551、-2.849,P=0.006、0.019）、200μg/L干预组（t=-10.347、-4.519,P=0.000、0.001）、500μg/L干预组（t=-3.541、-2.607,P=0.008、0.036）HREC迁移距离均明显增加,差异有统计学意义。流式细胞技术检查结果显示,200μg/L干预组细胞凋亡比例较对照组明显下调,差异有统计学意义（t=5.682,P=0.047）。RT-PCR及琼脂糖电泳结果显示,经IL-17干预后HREC中bFGF的mRNA表达水平呈升高趋势,而Caspase-3和TSP-1的mRNA表达水平呈下调趋势。Western blot检测结果显示,经IL-17干预后HREC中Caspase-3蛋白表达呈下调趋势。结论 IL-17能促进HREC增生、迁移,并抑制HREC凋亡。其机制可能与促进bFGF表达、抑制Caspase-3表达有关。