白细胞介素17在人视网膜血管内皮细胞增生、迁移及凋亡中的作用

摘要

目的:
　　视网膜新生血管一般是在视网膜大面积缺血、缺氧、视网膜微循环障碍的情况下发生。新生血管形成和渗漏导致的视网膜水肿、出血和脱离是多种致盲性眼病的原因。新生血管的形成与多种细胞因子相关，机制并未完全清楚。探索其可能的发病机制，寻找有效的干预方法是当前眼科学的重点和热点。白介素17（Interleukin17, IL-17）分子属于前炎症因子，是IL-17家族中的重要分子，在介导炎症反应、促进炎症因子分泌等方面发挥重要作用。以往有研究认为IL-17分子通过促进肿瘤新生血管的发生，影响肿瘤的生长及愈后。而IL-17在视网膜新生血管发生过程中的作用等方面报道不多。为验证IL-17分子在视网膜新生血管发生过程中的作用，本研究通过体外培养人视网膜血管内皮细胞（HREC），使用不同浓度的人重组 IL-17蛋白进行干预，观察不同浓度下IL-17对HREC增生、迁移以及凋亡的影响，并进一步探讨其具体作用机制，以期对视网膜新生血管的发病机制以及为临床探索新型治疗靶点提供有益的理论依据。
　　材料和方法:
　　1.体外培养 HREC，并取对数生长期的细胞进行实验。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）检测HREC中IL-17受体（IL-17R）基因和蛋白水平的表达。
　　2.以浓度50、100、200、500μg/L的IL-17培养液干预HREC，采用细胞增生试剂盒-8（CCK-8）增生分析法检测不同浓度IL-17对HREC细胞增生的作用。
　　3.以浓度50、100、200、500μg/L的IL-17培养液干预HREC，采用细胞划痕法测定不同浓度IL-17对HREC细胞迁移的影响。
　　4.以浓度200μg/L的IL-17培养液干预HREC，采用流式细胞技术检测IL-17对HREC细胞凋亡的影响。
　　5.以1、2 mg/L的IL-17培养液干预HREC，应用RT-PCR检测HREC中碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）、凝血酶敏感蛋白-1（TSP-1）的mRNA表达。
　　6.以1、2 mg/L的IL-17培养液干预HREC，Western blot检测细胞中Caspase-3的蛋白表达。
　　结果:
　　1. RT-PCR、Western blot检测到HREC细胞中基因和蛋白水平IL-17R的表达。
　　2. CCK-8增生分析法结果显示，随着IL-17培养液的浓度不断增加，A值呈上升趋势。与对照组比较，200、500μg/L干预组A值的升高差异均有统计学意义（t=-3.235、-6.276，P=0.032、0.000）。
　　3.细胞划痕法检测结果显示，干预12、24 h时，100μg/L干预组（t=-3.551、-2.849，P=0.006、0.019）、200μg/L干预组（t=-10.347、-4.519，P=0.000、0.001）、500μg/L干预组（t=-3.541、-2.607，P=0.008，0.036）HREC迁移距离均明显增加，差异有统计学意义。
　　4.流式细胞技术检查结果显示，200μg/L干预组细胞凋亡比例较对照组明显下调，差异有统计学意义（t=5.682，P=0.047）。
　　5. RT-PCR及琼脂糖电泳结果显示，经IL-17干预后HREC中bFGF的mRNA表达水平呈升高趋势，而Caspase-3和TSP-1的mRNA表达水平呈下调趋势。
　　6. Western blot检测结果显示，经IL-17干预后HREC中Caspase-3蛋白表达呈下调趋势。
　　结论:
　　1. IL-17具有促进HREC增生和迁移，及抑制HREC凋亡的作用。
　　2.其机制可能与促进bFGF的表达、抑制Caspase-3的表达相关。

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封面

声明

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英文摘要

目录

前言

参考文献

第一部分

实验材料与仪器

实验方法

结果

讨论

结论

附图

参考文献

第二部分 IL-17对人视网膜毛细血管内皮细胞增生、迁移和凋亡的影响及机制

第一章IL-17对人视网膜毛细血管内皮细胞增生、迁移和凋亡的影响

第二章 IL-17对人视网膜毛细血管内皮细胞影响机制的探讨

附图

参考文献

全文总结

综述: 角膜新生血管治疗研究新进展

英文缩略词表

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