卵巢癌细胞诱导T淋巴细胞凋亡的实验研究

摘要

目的探讨卵巢癌细胞诱导T淋巴细胞凋亡及一氧化氮与细胞内游离钙离子在T淋巴细胞凋亡过程中的作用.方法分别采用电子显微镜、流式细胞仪观察3个卵巢癌细胞株(OVCAR3、CAOV3和SKOV3)的培养上清液诱导的CD+8 T淋巴细胞的凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测诱导型一氧化氮合成酶(iNOS) mRNA的表达;Fura-2荧光负荷技术和酶联免疫(EIA)法分别检测细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)和环鸟苷酸(cGMP)浓度.结果 (1)分别经卵巢癌细胞株OVCAR3、CAOV3和SKOV3细胞培养的上清液作用后,CD+8 T淋巴细胞出现典型的凋亡改变,即染色质固缩和片段化;流式细胞仪上见凋亡峰;细胞凋亡率[分别为(23.8±3.5)%,(23.1±2.9)%、(24.2±4.9)%]较对照[(4.6±0.5)%]明显增高(P<0.01);(2)CD+8 T淋巴细胞凋亡过程中iNOS mRNA的表达(分别为1.14±0.03,1.05±0.04,1.16±0.02)较对照(0.60±0.03)显著增高(P<0.01);细胞内游离[Ca2+]i[分别为(380±38)、(366±13)、(356±20) nmol/L]和cGMP浓度[分别为(0.65±0.09)、(0.62±0.16)、(0.57±0.12) pmol/ml]均较对照[分别为(184±11)nmol/L、(0.29±0.04) pmol/ml]明显升高(P<0.01).结论卵巢癌细胞能诱导CD+8 T淋巴细胞凋亡,一氧化氮与细胞内游离钙离子在此过程中起重要作用.