H因子结合蛋白单克隆抗体的制备及ELISA法含量检测初探

摘要

目的:制备B群脑膜炎球菌H因子结合蛋白A(fHBP A)和H因子结合蛋白B(fHBP B)亚家族的单克隆抗体,建立检测fHBP抗原含量的ELISA方法.方法:重组表达并纯化fHBP A(His)和fHBP B(His)标签蛋白免疫小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选3株稳定分泌抗fHBP单克隆抗体的细胞株A,B和AB.以抗AB为一抗,辣根过氧化物酶标记抗A、抗B为二抗,分别建立检测fHBP A和fHBP B的双抗夹心ELISA方法.结果:3种单抗效价均在4.4×105～8.8×105,Western Blot及ELISA显示3种抗体均有结合特异性,且单抗AB和A,B对应不同的抗原识别位点,相互独立.双抗夹心ELISA方法灵敏度达到10ng·mL-1,变异系数＜10％.结论:采用单克隆抗体检测fHBP抗原的ELISA方法特异性和适用性良好,为进一步建立快速灵敏检测和鉴定fHBP抗原的方法奠定了基础.