HPV阳性宫颈癌细胞特异性穿膜肽PTP的穿膜特性研究

摘要

目的:证实宫颈癌细胞特异性细胞膜穿透肽特异性穿膜并优化穿膜条件.方法:将编码人乳头瘤病毒(HPV)阳性宫颈癌细胞特异性穿膜肽(PTP)的cDNA片断与编码绿色荧光蛋白(GFP)的基因片断融合,克隆至原核表达质粒pET15b克隆位点,构建pET15b-GFP-PTP重组原核表达载体.转化大肠杆菌BL21(DE3)并表达GFP-PTP融合蛋白,纯化后的GFP-PTP融合蛋白作用于体外培养的HPV阳性宫颈癌细胞株HeLa,Siha,肺癌细胞株A549及正常脐静脉内皮细胞ECV304.利用合成的标记短肽探讨优化穿膜条件.结果:荧光显微镜观察发现,与融合蛋白GFP-PTP共孵育后的Hela和Siha细胞胞浆及胞核内有绿色荧光均匀分布,而A549及ECV304胞内无绿色荧光.与GFP共孵育的任何细胞内均无绿色荧光.流式细胞术分析结果显示PTP对HeLa,Siha细胞的穿膜效率分别为33.2%和28.9%.10%DMSO处理细胞后可增强PTP特异性穿透HPV阳性宫颈癌细胞株的胞膜并改善胞浆内分布.结论:本研究结果为进一步探讨PTP作为宫颈癌防治的靶向导入载体奠定了基础.