溶瘤病毒联合新型小分子抑制剂治疗胶质瘤的实验研究

摘要

目的 研究新型水疱口炎病毒VSVΔM51联合新型小分子抑制剂—核糖体S6激酶1（RSK1）抑制剂BI-D1870和Polo样激酶1（PLK1）抑制剂BI2536对胶质瘤细胞的体外杀伤效果。方法 （1）将体外培养的GL261、CT2A、HS68细胞分为对照组、雷帕霉素组、BI-D1870组、BI-2536组、VSVΔM51组、雷帕霉素+VSVΔM51组、BI-D1870+VSVΔM51组、BI2536+VSVΔM51组,分别用100 nmol/L雷帕霉素,10 μmol/L BI-D1870,100 nmol/L BI-2536预处理2 h后感染0.1感染复数（MOI） VSV△M51病毒,72 h后采用Alarma Blue法测定细胞的存活率；分别用上述药物预处理1 h后感染10 MOI VSV△M51病毒,24 h后活化Caspase-3染色检测GL261细胞的凋亡；Western blotting检测细胞凋亡蛋白聚ADP-核糖聚合酶（PARP）的表达；Annexin V-FITC/碘化丙啶（PI）双染法检测细胞凋亡。（2）将GL261、CT2A细胞细胞分为VSVΔM51组、雷帕霉素+VSVΔM51组、BI-D1870+VSVΔM51组、BI2536+VSVΔM51组,分别用上述药物预处理1 h后感染0.1 MOI VSV△M51病毒,48 h后荧光显微镜下观察细胞中绿色荧光蛋白（GFP）的表达；IVIS200活体成像系统检测4组细胞病毒荧光素酶的变化；（3）15只CT2A细胞颅内种植胶质瘤模型小鼠,按随机数字表法分为VSV△M51组、BID-1870+VSV△M51组和BI2536+VSVΔM51组,每组5只。后2组小鼠分别腹腔注射BI-1870（100 mg/kg）、静脉注射BI-2536（20 mg/kg）,24 h后3组小鼠均静脉注射病毒VSV△M51,24 h、72 h后IVIS200活体成像系统检测病毒荧光素酶；15只GL261细胞颅内种植胶质瘤模型小鼠的分组和处理同上,48 h后荧光显微镜下观察病毒GFP的表达；病毒噬斑法检测小鼠的病毒滴度。结果 （1）与对照组、雷帕霉素组、VSVΔM51组、BI-D1870组、BI-2536组比较,雷帕霉素+VSVΔM51组、BI-D1870+VSVΔM51组、BI2536+VSVΔM51组细胞存活率显著降低,差异有统计学意义（P＆0.05）。活化Caspase-3染色检测显示对照组无凋亡,雷帕霉素组、BI-D1870组、BI-2536组、VSVΔM51组可见少量凋亡小体,但雷帕霉素+VSVΔM51组、BI-D1870+VSVΔM51组、BI2536+VSVΔM51组凋亡小体明显增多。Western blotting检测显示对照组、雷帕霉素组、BI-D1870组、BI-2536组、VSVΔM51组GL261、CT2A细胞活化PARP蛋白的表达少于雷帕霉素+VSVΔM51组、BI-D1870+VSVΔM51组、BI2536+VSVΔM51组。Annexin V-FITC/PI染色结果与活化Caspase-3染色结果一致。（2）与VSVΔM51组、雷帕霉素+VSVΔM51组比较,BI-D1870+VSVΔM51组、BI2536+VSVΔM51组细胞GFP的表达增强、病毒荧光素酶更亮,差异均有统计学意义（P＆0.05）。（3）72 h后VSV△M51组、BID-1870+VSV△M51组、BI2536+VSV△M51组CT2A细胞颅内种植胶质瘤模型小鼠荧光素酶亮度依次增加,差异有统计学意义（P＆0.05）。48 h后VSV△M51组、BID-1870+VSVΔM51组、BI2536+VSV△M51组GL261细胞颅内种植胶质瘤模型小鼠的病毒滴度依次增加,差异均有统计学意义（P＆0.05）。结论 2种小分子抑制剂都在一定程度上促进了VSV△M51病毒的复制,进而增强了对胶质瘤细胞的杀伤作用,并且其增效效果明显优于雷帕霉素。