耳针联合神经生长因子对拟AD大鼠学习记忆能力的改善作用研究

摘要

目的观察耳穴针刺和神经营养因子（NGF）联合应用对拟AD大鼠学习记忆能力的影响,并探讨其可能的机制。方法雄性SD大鼠40只按照随机数字表法分为对照组、模型组、耳针组及联合组,每组10只。后3组大鼠海马CA1区注射冈田酸建立拟AD大鼠模型;耳针组和联合组大鼠在此基础上用无菌针灸针埋入大鼠冈田酸注射侧耳肾、脑穴位,每日捻针1次,每次1min,共4周;联合组大鼠在冈田酸注射完毕后,于侧脑室注入0.1 g/L的NGF 5μL,每隔1天同样剂量注射1次,共5次。观察各组大鼠Morris水迷宫行为学改变,流式细胞仪检测海马细胞凋亡,免疫组化染色方法观察胶质神经纤维蛋白（GFAP）和胆碱乙酰转移酶（ChAT）的表达,Bielschowsky染色观察神经原纤维缠结（NFT）,表达Western blotting法检测海马Tau蛋白在Ser396位点（Tau-Ser396）磷酸化程度。结果与耳针组比较,联合组Morris水迷宫定向航行实验中平均逃避潜伏期明显缩短,空间探索实验中第Ⅲ象限活动时间明显延长、穿越站台次数明显增多;海马细胞凋亡率明显降低;海马CA1区GFAP免疫反应阳性细胞明显减少,ChAT免疫反应阳性细胞明显增多,NFT明显减少;海马Tau-Ser396磷酸化水平明显降低;差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论（1）耳肾、脑穴位针刺和NGF联合应用能明显改善拟AD大鼠学习记忆能力,且比单用耳针的效果更好;（2）其机制可能与减少脑细胞凋亡、减少星形胶质细胞的异常活化与增生、改善中枢胆碱能系统功能,以及抑制Tau蛋白的异常磷酸化有关。