信号蛋白质14-3-3ζ的高效融合表达和鉴定

摘要

目的利用分子克隆技术在原核细胞中研究14-3-3ζ蛋白的表达. 方法 14-3-3ζ cDNA 经测序后,亚克隆至pBK-CMV表达载体,转化大肠杆菌BL21菌株,筛选阳性克隆,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达. 结果经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western blot)分析,表达的融合蛋白相对分子质量为32 000左右,能与14-3-3ζ蛋白特异性多克隆抗体发生免疫结合反应. 结论人14-3-3ζ蛋白在原核细胞中有大量表达,且具有良好的免疫反应性.