人垂体腺瘤细胞原代培养的纯化

摘要

背景与目的:较纯的人垂体腺瘤细胞对垂体腺瘤的生物学特性、病因、发病机制等的研究非常重要,本文探讨原代培养垂体腺瘤的细胞纯化方法.方法:采用三种原代培养方法对垂体腺瘤细胞进行培养,方法Ⅰ为目前常用的垂体瘤细胞培养方法,方法Ⅱ结合使用右旋颉氨酸(D-valine)替代左旋颉氨酸(L-valine)的DMEM D-valine培养液,方法Ⅲ采用反复贴壁法结合DMEM D-valine培养液培养.观察其细胞形态变化和生长特征.免疫组织化学染色法检测培养细胞生长激素(growth hormone,GH)、泌乳素(prolactin,PRL)的表达.结果:3种方法均能成功培养出垂体腺瘤细胞,呈圆形或椭圆形,其纯度随培养时间的延长逐渐下降,培养第20天其平均纯度分别为40%、46%、96%.方法Ⅲ明显高于方法Ⅰ和方法Ⅱ,差异具有显著性意义(P＜0.01);腺瘤细胞分别呈GH、PRL阳性表达,成纤维细胞表达Ⅰ型胶原.结论:反复贴壁法结合DMEM D-valine培养液培养法可得到纯度达95%以上的人垂体腺瘤细胞,纯化后的细胞可分别呈GH和PRL阳性表达,为进一步研究人垂体腺瘤的发病机理、药物治疗和颅外移植等方面奠定了实验基础.