NADPH氧化酶介导血管紧张素Ⅱ诱导的腹膜间皮细胞转分化及细胞外基质积聚

摘要

目的探讨NADPH氧化酶在血管紧张素（Ang）Ⅱ诱导的腹膜间皮细胞转分化以及细胞外基质积聚中的作用。方法体外培养SD大鼠原代腹膜间皮细胞,静止24 h后,随机分为以下4组:正常对照组,AngⅡ(10-7 mol/L)组,AngⅡ+Los（洛沙坦,10μmol/L）组及AngⅡ+DPI（NADPH氧化酶活性抑制剂,10μmol/L）组。应用荧光染料（DCF）及激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧（ROS）的产生。RT-PCR检测NADPH氧化酶亚单位p47phox以及纤溶酶原激活物抑制剂（PAI）1、α平滑肌肌动蛋白（SMA）、E钙黏蛋白（cadherin）mRNA的表达。Western印迹检测p47phox、α-SMA的蛋白表达。结果（1）外源性AngⅡ可显著增加大鼠腹膜间皮细胞ROS的产生,刺激15 min后,ROS的表达较对照组上升了（3.64±0.53）倍。DPI和洛沙坦可显著抑制AngⅡ刺激后ROS的产生（P＜0.05）。（2）AngⅡ刺激腹膜间皮细胞后, NADPH氧化酶亚单位p47phox mRNA和蛋白的表达均呈上升趋势。洛沙坦和DPI可阻断由AngⅡ诱导的p47phox表达上调（P＜0.05）。（3）AngⅡ诱导α-SMA表达的上调以及E-cadherin mRNA的下调,洛沙坦和DPI可部分逆转AngⅡ的这种作用。（4）AngⅡ刺激8 h后可明显上调PAI-1的mRNA表达,为正常对照组的（3.06±0.77）倍。洛沙坦和DPI可明显阻断PAI-1的表达上调（P＜0.05）。结论NADPH氧化酶依赖产生的ROS介导了AngⅡ诱导的腹膜间皮细胞转分化及细胞外基质积聚。阻断AngⅡ的作用及抑制NADPH氧化酶的表达和活性可作为防治腹膜纤维化的潜在治疗靶点。