白细胞介素6对体外培养人脐动脉平滑肌细胞成骨样转化、钙化的影响

摘要

目的研究白细胞介素6（IL-6）对体外培养人脐动脉平滑肌细胞（HUASMC）成骨样转化、钙化的作用及可能的信号通路。方法组织植块法原代培养HUASMC。培养基加入不同浓度重组人IL-6（rhIL-6）孵育细胞,设空白对照组。茜素红S钙沉积染色及甲氧-酚酞络合酮法检测细胞层钙盐含量。实时定量PCR、荧光定量法以及Western印迹法分别检测骨特异性碱性磷酸酶（BAP）、骨桥蛋白（OPN）、骨形成蛋白2（BMP2）和骨保护素（OPG）基因以及蛋白表达。凝胶迁移滞后实验（EMSA）检测核心结合因子α1亚基（Cbfα1）的结合活力,以及分别应用p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）抑制剂SB203580和蛋白激酶C二氢神经鞘氨醇（DHC）后Cbfα1的结合活力。结果rhIL-6 50μg/L诱导12 d,细胞基质层茜素红S染色阳性。与对照组相比,细胞层钙盐含量在rhIL-6 10μg/L组刺激9 d[（0.76±0.02）mmol/g蛋白]和12 d[（1.54±0.11）mmol/g蛋白]升高,50μg/L组刺激6 d[（1.81±0.03）mmol/g蛋白]、9 d [（2.08±0.10）mmol/g蛋白]和12 d[（3.22±0.18）mmol/g蛋白]升高,并呈时间、剂量依赖地增加。rhIL-6 10μg/L刺激12 h,BMP2 mRNA（3.04±0.07）和蛋白（8.14±0.41）及BAP mRNA （2.51±0.11）和蛋白（3.96±0.54）表达上调;刺激72 h,OPN mRNA（3.14±0.32）和蛋白（2.57±0.43）水平及OPG mRNA（4.06±0.24）和蛋白（3.46±0.34）水平上调。rhIL-6刺激6 h,Cbfα1结合活力增加;DHC能够部分抑制rhIL-6诱导的Cbfα1结合活力增加,SB203580没有明显作用。结论IL-6体外能够诱导HUASMC发生钙化和成骨样转分化,这可能是临床观察到IL-6与血管钙化相关的机制之一。IL-6的这一作用可能与细胞内蛋白激酶C通路的活化有关。