基于直接标记法尿微量白蛋白检测抗体微阵列的构建

摘要

目的探讨基于直接标记法的尿微量白蛋白检测抗体微阵列（也称抗体芯片）构建方法,并评价其技术可行性。方法通过玻片处理、活化、固定等程序构建白蛋白抗体芯片。摸索用生物素标记标准品白蛋白及尿液样本的最佳条件。经封闭后加入生物素标记的标准品白蛋白,孵育,洗涤后加入链酶亲和素-Cy3,再经过孵育、洗涤后,用共聚焦激光扫描仪获取荧光强度值。根据不同浓度标准品白蛋白的荧光信号强度值做出浓度-信号强度曲线,并评价其检测灵敏度、特异性、重复性。收集临床糖尿病患者尿液标本,对尿液样本同时行免疫比浊法和抗体芯片法检测白蛋白值。结果生物素标记标准品白蛋白和样本的最佳总蛋白/生物素质量比为2:1。根据标准品白蛋白所做出的标准曲线其R~2＞0.99;捕获抗体浓度为1 g/L时,最低白蛋白检测浓度为0.0617 mg/L。阵列内变异系数为3.35%～7.59%;阵列间变异系数为6.78%～9.22%。抗体芯片检测值与免疫比浊法检测值呈正相关（R~2=0.9199,P＜0.01）。结论成功构建基于直接标记法的抗体芯片,其具有简单、快速、高效、高灵敏度和重复性好等特点;具有开发应用于微量白蛋白尿大规模人群筛查的潜力。