热休克蛋白47在转化生长因子β1刺激的肾小管上皮细胞转分化中的作用

摘要

目的阐明热休克蛋白47（HSP47）在转化生长因子β1（TGF-β1）刺激的人近端肾小管上皮细胞（HK-2细胞）向间充质细胞转分化（EMT）中的作用及可能机制,探讨以HSP47为靶点抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞EMT过程。方法 Western印迹检测不同浓度TGF-β1（0、2.5、5、10μg/L）刺激HK-2细胞不同时间（0、12、24、48 h）后HSP47的表达;用10μg/L TGF-β1刺激HK-2细胞,Western印迹及实时定量PCR（real-time PCR）检测波形蛋白（vimentin）及紧密连接蛋白（zona occludens-1,ZO-1）的表达变化,Western印迹检测不同时间磷酸化（p）-Smad3及Smad3的表达;转染HSP47 siRNA及HSP47 siRNA阴性对照,对照组为无基因抑制效果的一段siRNA,再予TGF-β1刺激,Western印迹检测HSP47、p-Smad3及Smad3的表达,Western印迹及real-time PCR检测vimentin及ZO-1的表达。结果 TGF-β1干预HK-2细胞,HSP47蛋白呈浓度和时间依赖性表达上调（均P＜0.05）。Western印迹、real-time PCR结果显示10μg/L TGF-β1刺激后,HK-2细胞vimentin蛋白及mRNA表达呈时间依赖性升高（均P＜0.05）,ZO-1蛋白及mRNA表达呈时间依赖性降低（均P＜0.05）。Western印迹结果显示TGF-β1促进Smad3磷酸化,上调p-Smad3/Smad3表达（P＜0.05）,任30 min时达到峰值,随后稍下降,在24~48h达到另一峰值。与TGF-β1组相比,转染HSP47 siRNA后HSP47蛋白表达明显下调（P＜0.05）,同时ZO-1蛋白及mRNA表达上调（均P＜0.05）,vimentin蛋白及mRNA表达下调（均P＜0.05）;同时p-Smad3/Smad3表达下调（P＜0.05）。结论 HSP47可促进肾小管上皮细胞EMT,可能与TGF-β1-Smad3信号通路活化有关。