AT2R基因在体可调控表达对大鼠血管损伤后MMP-2表达的影响

摘要

目的 研究间充质干细胞(MSCs)移植实现血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)基因在体可调控表达对大鼠颈动脉损伤后新生内膜中基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响.方法 采用常规分子生物学方法连续两个回合转染体外培养的MSCs,获得受到强力霉素(Dox)调控的低背景、高诱导表达Ar2R基因的双重稳定MSCs系;建立大鼠颈动脉球囊损伤动物模型,将双重稳定MSCs系种植于动脉损伤局部,通过尾静脉注射Dox,分别于术后14、28d行病理切片,采用免疫印迹、免疫组化法及RT-PCR等技术检测AT2R基因在新生内膜中的表达及其对MMP-2表达的影响.结果 成功建立了低背景、高诱导表达AT2R基因的双重稳定MSCs系.该MSCs系受到Dox给予/去除的紧密调控,诱导后48h即可使AT2R显著表达,在Dox干预72h后AT2R表达进一步增强;这种表达的可诱导性至少在8周内维持稳定.免疫印迹、免疫组化及RT-PCR检测显示:球囊损伤大鼠血管后14d及28d,Dox组新生内膜中AT2R的表达显著高于对照组、MSC组、MSC转染组(P＜0.01);同时,Dox组新生内膜中MMP-2阳性染色较对照组、MSC组和MSC转染组显著减弱(P＜0.01).结论 血管损伤局部导入双重稳定MSCs系后AT2R表达受到Dox的良好调控.Dox诱导AT2R表达后,新生内膜中MMP-2表达减少,可能是MSCs细胞移植实现AT2R基因在体可调控表达有效抑制新生内膜增生的机制之一.