绿色荧光蛋白高表达动物模型的建立及在活体成像中的应用

摘要

目的建立绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）基因标记的小鼠Lewis肺癌（Lewislungcarcinoma，LLC）移植瘤裸鼠模型，利用自行研制的荧光分子成像仪实时地观察肿瘤的生长、转移、肿瘤血管生成及药物疗效的观察。方法（1）体外扩增稳定表达GFP的LLC肿瘤细胞，荧光倒置显微镜观察绿色荧光表达情况；（2）LLC-GFP细胞以浓度为2×106／ml接种裸鼠背部，以建立LLC裸鼠移植瘤模型；（3）分别在接种瘤细胞2周后，每隔3天对裸鼠进行活体成像1次，观察肿瘤的生长、转移及局部血管生成情况，同时给予环磷酰胺（CTX）10mg／kg治疗并测定抑瘤率。结果（1）培养24h后，用荧光倒置显微镜观察，可见几乎所有LLC—GFP细胞发出明亮的绿色荧光；（2）LLC裸鼠移植瘤模型建立后，用波长470nm的蓝光激发，通过荧光活体成像仪观察可见肿瘤发出绿色荧光；（3）活体成像可见肿瘤的生长呈进行性动态变化，4周后可见胸腹腔等广泛转移，同时观察到肿瘤的血管生成和发展情况，环磷酰胺组肿瘤大小明显小于阴性对照组（P〈0．05）。结论荧光分子成像的方法可以对肿瘤的生长、转移、血管生成及药物疗效判定等方面进行无创、实时地连续监测，为研究肿瘤提供了新的思路和方法。