八月札乙醇提取物含药血清通过抑制糖酵解调控BEL-7404细胞增殖与凋亡

摘要

目的 研究八月札乙醇提取物含药血清对BEL-7404细胞增殖和凋亡及糖酵解的影响,探讨其可能的作用机制。方法 制备八月札乙醇提取物低(生药3.15 g·kg^(–1))、中(生药6.30 g·kg^(–1))、高(生药12.60 g·kg^(–1))剂量组及空白对照组的含药血清作用于体外培养的BEL-7404细胞。采用CCK-8法检测八月札乙醇提取物含药血清对细胞增殖的影响,采用DAPI荧光染色法观察八月札乙醇提取物含药血清对细胞凋亡的影响,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测八月札乙醇提取物含药血清对细胞凋亡率的影响,采用葡萄糖检测试剂盒、乳酸检测试剂盒测定葡萄糖摄取量、乳酸生成量,采用Western blotting检测八月札乙醇提取物含药血清对BEL-7404细胞中活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleavedcaspase-3)、活化的多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved poly ADP-ribose polymerase,cleaved PARP)、己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)、丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)和乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)及丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine-threonine kinase 2,Akt2)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(phosphorylated serine-threonine kinase,p-Akt2)蛋白表达的影响。结果 八月札乙醇提取物含药血清对BEL-7404细胞有明显的增殖抑制作用(P<0.05或P<0.01),使细胞核分散,细胞内形成凋亡小体。八月札乙醇提取物含药血清能显著升高BEL-7404细胞总凋亡率(P<0.01),并伴随着葡萄糖摄取量及乳酸生成量显著降低(均P<0.01),Western blotting检测表明八月札乙醇提取物中、高剂量组含药血清上调了促凋亡蛋白cleaved caspase-3和cleaved PARP的表达(P<0.05),下调了糖酵解相关酶HK2、PKM2及LDHA的蛋白表达(P<0.05或P<0.01),抑制Akt2的磷酸化(P<0.05或P<0.01)。结论 八月札乙醇提取物含药血清通过抑制糖酵解从而抑制BEL-7404细胞增殖及促进其凋亡。